發布時間:2023-06-26 21:41:49 人氣:2644
1、菌落:細菌培養后,由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落,簡稱CFU。通常用個數表示。
2、測試方法:沉降法,即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿,經48小時以上培養,在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數,來評定潔凈環境內的活微生物數,并以此來評定無塵室的潔凈度。
3、所用的儀器和設備
1)高壓消毒鍋:使用時參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進行操作。
2)恒溫培養箱:必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。
3)培養皿:一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
4、培養基:普通營養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化,冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養基注入培養皿,每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后,將培養基平皿放入30~35℃恒溫培養箱中培養數小時,若培養基平皿上確無菌落生長,即可供采樣用,制備好的培養基平皿應在2~8℃的環境中存放。
5、測試步驟
1)采樣方法:將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點,打開培養皿蓋,使培養基表面暴露0.5小時,再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2)培養,時間不少于48小時。每批培養基應有對照試驗,檢查培養基本身是否污染,可每批選定3只培養皿作對照培養。
3)菌落計數:用肉眼直接計數,然后用5~10倍放大鏡檢查,有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上菌落重疊,可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。
6、注意事項
1)測試用具要做滅菌處理,以確保測試的可靠性、正確性。
2)采取一切措施防止人為對樣本的污染。
3)對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
4)由于細菌種類繁多,差別甚大,計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察,不要漏計培養皿邊緣生長的菌落,并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別,必要時用顯微鏡鑒別。
5)采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量,如發現變質、破損或污染的應剔除。
7、測試規則
1)測試狀態
(1)沉降菌測試前:被測試無塵室(區)的溫濕度須達到規定的要求,靜壓差、必須控制在規定值內。被測試無塵室(區)已消毒。
(2)測試狀態有靜態和動態兩種,并在報告中注明測試狀態。
(3)測試人員:測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。靜態測試時,室內測試人員不得多于2個人。
2)測試時間
(1)對單向流,如100級凈化房間內及層流工作臺,測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。
(2)對非單向流,如10000級、100000級以上的凈化房間,測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。
8沉降菌計數
1)最少采樣點數目:可按表1確定。在滿足最少測點數的同時,還宜滿足最少培養皿數,見表2。??表1最少采樣點數目
面積(m2)? |
潔凈度級別 |
|||
|
100? |
10000? |
100000? |
300000 |
<10? |
2~3? |
2? |
2? |
2 |
≥10~<20? |
4? |
2? |
2? |
2 |
≥20~<40? |
8? |
2? |
2? |
2 |
≥40~<100? |
16? |
4? |
2? |
2 |
≥100~<200? |
40? |
10? |
3? |
3 |
注:表中的面積對于單向流無塵室是指送風面積,對于非單向流無塵室是指房間面積。?????????表2最少培養皿數
潔凈度級別? |
所需Φ90mm培養皿數(以沉降0.5小時計) |
100 |
?14 |
10000 |
2 |
100000 |
?2 |
300000 |
2 |
2)采樣點的布置:工作區測試點位置離地0.8~1.5m左右(略高于工作面)。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點,采樣點的布置應力求均勻,避免采樣點在某 局部區域過于集中,某局部區域過于稀疏。
3)記錄:測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態及測試數據。
4)結果計算:用計數方法得出各個培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見下式:m1+m2+……+mn
平均菌落數m=n
式中:m為平均菌落數;m1為1號培養皿菌落數;m2為2號培養皿菌落數;mn為n號培養皿菌落數;n為培養皿總數。
5)結果評定:用平均菌落數判斷無塵室的空氣中的微生物。
6)無塵室(區)內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準(見表3)。????????????????????表3
潔凈級別? |
100級? |
10000級? |
100000級? |
300000級 |
標準(平均)? |
1個/皿? |
3個/皿? |
10個/皿? |
15個/皿 |
7)若某無塵室(區)的平均菌落數超過評定標準,則必須對此區域先行消毒,然后重新測試兩次,測試結果必須合格。
主要參考文獻:國家標準GB/T 16294-1996